膳食(shi)纖維檢測(ce)的(de)工作(zuo)原理(li)和使(shi)用時(shi)的操(cao)作(zuo)方法

　　膳食(shi)纖維檢測(ce)是(shi)指碳(tan)水(shui)化(hua)合(he)物(wu)及(ji)其相類似(si)物(wu)質的總和(he)，包(bao)括多糖(tang)、寡糖(tang)、木質素(su)以及(ji)相關的植物(wu)物(wu)質。主要有纖維素(su)、半(ban)纖維素(su)、果(guo)膠及親水(shui)膠(jiao)體物質，如樹(shu)膠、海(hai)藻(zao)多糖(tang)等(deng)組分；另(ling)外(wai)還包括(kuo)植物(wu)細(xi)胞壁(bi)中所(suo)含(han)有的(de)木質素(su)；不(bu)被人(ren)體(ti)消(xiao)化酶(mei)所(suo)分解的物質，如抗性澱(dian)粉、抗性糊精(jing)、抗性低(di)聚(ju)糖(tang)、改(gai)性纖維素(su)、黏(nian)質、寡糖(tang)以及(ji)少(shao)量相(xiang)關成分，如(ru)蠟紙、角(jiao)質、軟木脂(zhi)等(deng)。

　　膳食(shi)纖維檢測(ce)的(de)操作(zuo)方法

　　1、試(shi)樣制(zhi)備試(shi)樣處(chu)理根據(ju)水(shui)分含(han)量、脂(zhi)肪含(han)量和(he)糖(tang)含(han)量進(jin)行適(shi)當(dang)的處(chu)理及(ji)幹(gan)燥，並(bing)粉碎、混(hun)勻過篩(shai)。

　　①脂(zhi)肪含(han)量＜10％的(de)試(shi)樣：若試(shi)樣水(shui)分含(han)量較(jiao)低(di)(<10%)，取(qu)試(shi)樣直(zhi)接反(fan)復(fu)粉碎，至*過篩(shai)。混(hun)勻，待用(yong)。

　　若試(shi)樣水(shui)分含(han)量較(jiao)高(≥10%)，試(shi)樣混(hun)勻後，稱(cheng)取(qu)適(shi)量試(shi)樣(mc，不(bu)少(shao)於50g)，置於(70±1)℃真空(kong)幹燥箱(xiang)內(nei)幹燥至(zhi)恒(heng)重。將(jiang)幹(gan)燥後試(shi)樣轉(zhuan)至(zhi)幹(gan)燥器(qi)中，待試(shi)樣溫(wen)度(du)降(jiang)到(dao)室溫(wen)後稱(cheng)量(MD)。根據(ju)幹燥前(qian)後試(shi)樣質量，計算試(shi)樣質量損(sun)失因子(zi)(f)。幹燥後試(shi)樣反(fan)復(fu)粉碎至*過篩(shai)，置(zhi)於幹(gan)燥器(qi)中待用(yong)。

　　②脂(zhi)肪含(han)量≥10％的(de)試(shi)樣：試(shi)樣需(xu)經脫脂處(chu)理。稱(cheng)取(qu)適(shi)量試(shi)樣(mc，不(bu)少(shao)於50g)，置於漏鬥中，按每(mei)克(ke)試(shi)樣25mL的(de)比(bi)例(li)加入石油(you)醚(mi)進(jin)行沖(chong)洗(xi)，連續3次。脫脂後將(jiang)試(shi)樣混(hun)勻再(zai)進(jin)行幹(gan)燥、稱(cheng)量(MD)，記(ji)錄脫(tuo)脂(zhi)、幹(gan)燥後試(shi)樣質量損(sun)失因子(zi)(f)。試(shi)樣反(fan)復(fu)粉碎至*過篩(shai)，置(zhi)於幹(gan)燥器(qi)中待用(yong)。

　　③糖(tang)含(han)量≥5％的(de)試(shi)樣：試(shi)樣需(xu)經脫糖(tang)處(chu)理。稱(cheng)取(qu)適(shi)量試(shi)樣(mc，不(bu)少(shao)於50g)，置於漏鬥中，按每(mei)克(ke)試(shi)樣10mL的(de)比(bi)例(li)加入85％乙醇(chun)溶液進(jin)行沖(chong)洗(xi)，棄乙醇(chun)溶液，連(lian)續3次。脫糖(tang)後將(jiang)試(shi)樣置(zhi)於(yu)40℃烘箱(xiang)內(nei)幹燥過夜(ye)，稱(cheng)量(MD)，記(ji)錄脫(tuo)糖(tang)、幹燥後試(shi)樣質量損(sun)失因子(zi)(f)。幹燥後試(shi)樣反(fan)復(fu)粉碎至*過篩(shai)，置(zhi)於幹(gan)燥器(qi)中待用(yong)。

　　2、酶(mei)解準確稱(cheng)取(qu)雙(shuang)份試(shi)樣(m)，約(yue)1g(至(zhi)0.1mg)，雙(shuang)份試(shi)樣質量≤0.005g。將(jiang)試(shi)樣轉(zhuan)置(zhi)於(yu)400～600mL高腳(jiao)燒(shao)杯中，加入0.05mol/LMES-TRIS緩沖(chong)液(ye)40mL，用磁力(li)攪拌(ban)直(zhi)至(zhi)試(shi)樣*分散(san)在緩沖(chong)液(ye)中。同(tong)時(shi)制(zhi)備兩個(ge)空(kong)白(bai)樣(yang)液(ye)與(yu)試(shi)樣液(ye)進(jin)行同(tong)步操(cao)作(zuo)，用於校正(zheng)試(shi)劑對測(ce)定的影響(xiang)。

　　膳食(shi)纖維檢測(ce)樣(yang)品分別用(yong)α-澱(dian)粉酶(mei)、蛋白(bai)酶(mei)、葡(pu)萄(tao)糖(tang)苷酶(mei)進(jin)行酶(mei)解消(xiao)化以去(qu)除蛋白(bai)質和可消(xiao)化的(de)澱(dian)粉。總膳食(shi)纖維（TDF）是(shi)先酶(mei)解，然(ran)後用乙(yi)醇(chun)沈澱(dian)，再(zai)將(jiang)沈澱(dian)物(wu)過濾(lv)，將(jiang)TDF殘渣用乙(yi)醇(chun)和丙(bing)酮(tong)沖(chong)洗(xi)，幹燥稱(cheng)重。不溶性和可溶性膳食(shi)纖維（IDF和SDF）是(shi)酶(mei)解後將(jiang)IDF過濾(lv)，過濾(lv)後的殘渣用熱水(shui)沖(chong)洗(xi)，經幹燥後稱(cheng)重。SDF是(shi)將(jiang)上述濾出液用(yong)4倍(bei)量的(de)95%乙醇(chun)沈澱(dian)，然(ran)後再(zai)過濾(lv)，幹(gan)燥，稱(cheng)重。TDF、IDF和SDF量通(tong)過蛋白(bai)質、灰分含(han)量進(jin)行校正(zheng)。