葉酸檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒流程使(shi)用(yong)與避坑指南

葉酸檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒流程使(shi)用(yong)與避坑指南

1.樣本(ben)采(cai)集與處(chu)理(li)規範(fan)  

標(biao)本新鮮度：血清/血漿需在采(cai)集後(hou)2小(xiao)時內(nei)分離(li)，避免(mian)溶(rong)血(xue)（溶血會導致(zhi)葉酸值(zhi)虛高，因紅細(xi)胞含高(gao)濃度葉酸）和(he)脂(zhi)血(xue)（脂(zhi)血(xue)會幹擾(rao)檢測(ce)結(jie)果，需空腹(fu)12小(xiao)時采(cai)血(xue)）。標(biao)本在(zai)2-8℃可(ke)穩(wen)定2天，-20℃可(ke)穩(wen)定1個月(yue)，但僅(jin)允(yun)許(xu)1次(ci)凍融(rong)，避免反(fan)復解凍導(dao)致(zhi)葉酸降解。  

抗凝(ning)劑(ji)選(xuan)擇：血漿樣本(ben)需使(shi)用(yong)EDTA或(huo)檸檬(meng)酸鈉抗凝(ning)，禁(jin)止使(shi)用(yong)肝素（可(ke)能(neng)抑(yi)制(zhi)酶反(fan)應(ying)）；尿液、胸腹(fu)水(shui)等(deng)需離(li)心取(qu)上清，細胞培養(yang)上清需通過反復凍(dong)融(rong)釋放細(xi)胞內葉酸。  

特(te)殊處(chu)理(li)要求(qiu)：含(han)生(sheng)物素（>5mg/d）治(zhi)療患(huan)者需停藥(yao)8小(xiao)時後(hou)采血(xue)；避免(mian)使(shi)用(yong)疊氮(dan)鈉防腐(fu)（抑制(zhi)HRP活性(xing)）；高劑(ji)量(liang)維生素C或(huo)亞(ya)葉酸可能(neng)幹(gan)擾(rao)檢測(ce)，需提(ti)前(qian)告(gao)知(zhi)實(shi)驗室。  

2.試(shi)劑(ji)保存與操(cao)作細(xi)節(jie)  

儲存條(tiao)件：試(shi)劑(ji)盒需2-8℃保存，避(bi)免(mian)冷凍；底(di)物A、B需避光(guang)保存，防(fang)止揮發(fa)或(huo)光解；標(biao)準(zhun)品稀(xi)釋(shi)後(hou)不可儲存(cun)，需現配現用(yong)；不同批號(hao)試(shi)劑(ji)嚴(yan)禁混用(yong)，避免影(ying)響(xiang)檢測(ce)線(xian)性(xing)。  

操(cao)作流(liu)程：試(shi)劑(ji)使(shi)用(yong)前需室溫平(ping)衡15-30分鐘；加(jia)樣(yang)時使(shi)用(yong)壹(yi)次性(xing)吸頭(tou)，避免(mian)交(jiao)叉汙(wu)染；溫(wen)育(yu)時(shi)間(jian)（如(ru)37℃孵(fu)育(yu)）需嚴(yan)格(ge)計(ji)時(shi)，誤差≤5分鐘；洗(xi)滌時(shi)需充(chong)分拍(pai)幹，避免(mian)殘留(liu)液影(ying)響(xiang)顯(xian)色(se)反應(ying)；顯(xian)色(se)反應(ying)需避光(guang)進(jin)行(xing)，終(zhong)止液加(jia)入(ru)後(hou)15分鐘內(nei)完(wan)成OD值(zhi)讀(du)取(qu)。  

儀(yi)器校準(zhun)：酶標(biao)儀需定期(qi)校(xiao)準(zhun)波長（450nm）和(he)光路(lu)，確(que)保吸光(guang)度測(ce)量(liang)準(zhun)確(que)性(xing)；洗(xi)板機(ji)需驗證(zheng)洗(xi)滌次(ci)數和(he)體積(ji)，避(bi)免(mian)洗(xi)板導致(zhi)背景值(zhi)升(sheng)高。  

3.結(jie)果解讀與質(zhi)量(liang)控制(zhi)  

參(can)考範(fan)圍(wei)：成(cheng)人(ren)血清葉酸正常(chang)範(fan)圍(wei)為(wei)3-20ng/mL（不同檢測(ce)方(fang)法差異(yi)大(da)，需參(can)考試(shi)劑(ji)盒說明書(shu)）；孕婦需關註(zhu)紅細胞葉酸（≥340nmol/L）以評估(gu)長期(qi)儲(chu)備，血清葉酸僅(jin)反(fan)映短期(qi)攝(she)入(ru)。  

幹(gan)擾(rao)因素：溶(rong)血、脂(zhi)血(xue)、黃疸可能(neng)幹(gan)擾(rao)結(jie)果；氨基(ji)蝶(die)呤(ling)、甲氨蝶(die)呤(ling)等結(jie)構類(lei)似物(wu)可(ke)能(neng)與葉酸競爭結(jie)合，導致(zhi)假(jia)陰性(xing)；高劑(ji)量(liang)生(sheng)物素（>50ng/mL）可(ke)能(neng)抑(yi)制(zhi)電化學發光反(fan)應。  

質(zhi)量(liang)控制(zhi)：每(mei)批檢測(ce)需包含(han)校(xiao)準(zhun)品（至少6個濃度點）和(he)質(zhi)控品（高、中、低值(zhi)）；結(jie)果需通過線(xian)性(xing)回歸(gui)（R²≥0.99）和(he)重復(fu)性(xing)（CV≤10%）驗證(zheng)；異常(chang)結(jie)果需復測(ce)或(huo)結(jie)合其他方(fang)法(fa)（如(ru)LC-MS/MS）確(que)認。  

4.特(te)殊場景(jing)與安全(quan)防護(hu)  

臨床應(ying)用(yong)：孕婦需在孕前3個月開始(shi)補(bu)充(chong)葉酸，檢測(ce)可(ke)評估(gu)補充(chong)效果；巨(ju)幼(you)細(xi)胞性(xing)貧血(xue)患(huan)者需結(jie)合維生素B12檢測(ce)，避(bi)免誤診；腫瘤患(huan)者需監測(ce)葉酸水平，指(zhi)導化療藥(yao)物(wu)（如(ru)甲(jia)氨(an)蝶(die)呤(ling)）劑(ji)量(liang)調(tiao)整。  

安全(quan)操(cao)作：實(shi)驗人(ren)員(yuan)需佩戴(dai)手(shou)套、口罩和(he)護目(mu)鏡(jing)，避(bi)免接(jie)觸(chu)終(zhong)止液和(he)底(di)物；廢棄物(wu)需按生(sheng)物(wu)危害處(chu)理(li)，防止環(huan)境(jing)汙染；試(shi)劑(ji)盒過期(qi)的(de)組(zu)分不可使(shi)用(yong)，需按說明書(shu)報(bao)廢。