抗性(xing)澱粉檢測(ce)物質(zhi)的提(ti)取(qu)及(ji)轉(zhuan)化(hua)

　　

　　抗性(xing)澱粉檢測(ce)可以影(ying)響(xiang)人和動(dong)物(wu)日糧中各種(zhong)養分(fen)的消(xiao)化(hua)與吸(xi)收(shou),對人(ren)的健(jian)康有(you)利。在(zai)延(yan)緩(huan)糖(tang)尿(niao)病人(ren)餐後血糖上(shang)升(sheng)、肥(fei)胖(pang)控制、預防腸道疾(ji)病、降(jiang)低血中膽(dan)固(gu)醇和能(neng)量消化(hua)率等(deng)具有(you)重要的生理功能。

　　

　　抗(kang)性(xing)澱粉檢測(ce)原(yuan)理

　　

　　樣(yang)品經前處(chu)理後，先在(zai)沸水浴(yu)中經耐(nai)高溫(wen)α-澱粉酶水解，使(shi)可(ke)消(xiao)化(hua)澱粉轉(zhuan)化(hua)成葡萄糖，離(li)心(xin)，棄(qi)去上清液，沈澱加入(ru)壹定(ding)濃(nong)度(du)的KOH使(shi)之溶(rong)解，經(jing)葡萄糖澱粉酶作用將其(qi)轉(zhuan)化(hua)成葡萄糖，用葡萄糖試劑盒測定(ding)葡萄糖含量，乘(cheng)以0.9即(ji)換(huan)算成抗性(xing)澱粉含量。

　　

　　用於抗性(xing)澱粉檢測(ce)的儀(yi)器設(she)備

　　

　　a)離(li)心(xin)機

　　

　　b)電(dian)熱(re)恒溫(wen)水浴(yu)鍋

　　

　　c)酸度(du)計(ji)

　　

　　d)分光光(guang)度(du)計(ji)

　　

　　e)電(dian)子(zi)分(fen)析(xi)天(tian)平

　　

　　f)容量瓶(ping)（100mL、1000mL）

　　

　　選擇的試劑

　　

　　除特殊說明外(wai)，實驗用水為蒸餾水，試劑為分析(xi)純(chun)。

　　

　　a)乙mi

　　

　　b)耐(nai)高溫(wen)α-澱粉酶（120,000NU/mL）

　　

　　c)2mol/L氫(qing)氧化(hua)鉀溶(rong)液

　　

　　d)磷(lin)酸鹽緩(huan)沖液(ye)（pH5.8）

　　

　　分(fen)別稱取磷(lin)酸二(er)氫(qing)鉀(jia)8.34g與磷(lin)酸氫(qing)二(er)鉀0.87g,，加適(shi)量水使其(qi)溶解，定(ding)容(rong)至(zhi)1000mL。

　　

　　e)醋酸鹽緩(huan)沖液(ye)(pH4.4)

　　

　　分(fen)別量取0.2mol/L醋酸溶(rong)液(ye)30.5mL及(ji)0.2mol/L醋酸鈉(na)溶(rong)液(ye)19.5mL混(hun)勻。

　　

　　f)葡萄糖澱粉酶（100,000U/mL）

　　

　　g)2mol/L鹽酸溶(rong)液(ye)

　　

　　h)葡萄糖試劑盒

　　

　　樣(yang)品前處(chu)理

　　

　　糧食(shi)、豆類(lei)、糕點、餅(bing)幹等較(jiao)幹燥的樣(yang)品

　　

　　稱取2g～5g（到(dao)0.001g）磨碎(sui)過40目篩的樣(yang)品，置於放有(you)慢(man)速(su)濾紙(zhi)的漏(lou)鬥中，用30mL乙mi分三(san)次(ci)洗(xi)去樣(yang)品中脂肪(fang)，棄(qi)去乙mi。

　　

　　蔬菜(cai)、水果、各種(zhong)糧豆含水熟(shu)食(shi)制品

　　

　　按1：1加水在(zai)組(zu)織搗碎(sui)機中搗成勻漿(jiang)（蔬菜(cai)、水果需先洗(xi)凈、涼幹，取可(ke)食(shi)部分(fen)）。稱取(qu)5g～10g勻漿(jiang)（液(ye)體(ti)樣(yang)品可直接(jie)量取），於250mL錐形(xing)瓶(ping)中，加30mL乙mi振搖(yao)提(ti)取(qu)（除去樣(yang)品中脂肪(fang)），過(guo)濾(lv)去除乙mi，再用30mL乙mi淋洗(xi)兩(liang)次(ci)，棄去乙mi。

　　

　　抗性(xing)澱粉檢測(ce)含量測定(ding)

　　

　　抗(kang)性(xing)澱粉提取及(ji)轉(zhuan)化(hua)

　　

　　取0.5g試樣(yang)放入(ru)50mL離(li)心(xin)管(guan)，加(jia)入(ru)10mL(pH5.8)磷(lin)酸鹽緩(huan)沖溶(rong)液(ye)和1mL耐(nai)高溫(wen)α-澱粉酶，沸水浴(yu)30min，冷卻(que)至(zhi)室(shi)溫(wen)，離(li)心(xin)(5000r/min，20min)棄(qi)上(shang)清(qing)液(ye)；加入(ru)10mL蒸餾水，洗(xi)滌(di)沈澱，離(li)心(xin)棄(qi)上(shang)清(qing)液(ye)(該步(bu)驟至(zhi)少(shao)重復(fu)壹次(ci))，加入(ru)6mL2mol/LKOH溶(rong)解(jie)沈(chen)澱(dian)，室(shi)溫(wen)下振蕩(dang)30min，促(cu)進(jin)沈(chen)澱(dian)溶(rong)解，以2mol/LHCl調(tiao)pH至(zhi)中性(xing)，加入(ru)5mL醋酸鹽緩(huan)沖液(ye)(pH4.4)和1mL葡萄糖澱粉酶。60℃水浴(yu)45min。離(li)心(xin)(5000r/min，20min)，收(shou)集上(shang)清(qing)液，再用10mL蒸餾水洗(xi)滌(di)沈澱(該步驟重復(fu)兩次(ci))，離(li)心(xin)(5000r/min，20min)，取(qu)上(shang)清(qing)液(ye)。合並(bing)所(suo)收(shou)集上(shang)清(qing)液，定(ding)容(rong)至(zhi)100mL容(rong)量瓶(ping)中。用葡萄糖試劑盒測樣(yang)品中葡萄糖含量，乘(cheng)以0.9即(ji)為(wei)抗性(xing)澱粉的量。

　　

　　葡萄糖含量的測(ce)定(ding)

　　

　　根據(ju)葡萄糖試劑盒以及(ji)使用說明書(shu)，用分光光度(du)計(ji)測定(ding)樣(yang)品中葡萄糖的含(han)量，以蒸餾水為空(kong)白管(guan)，以試劑盒自(zi)帶(dai)標準液為(wei)標準管，把(ba)試劑與工作液按壹定(ding)比例混合(he)，置37℃水浴(yu)15min，以空白管(guan)調(tiao)零(ling)，在(zai)505nm波(bo)長下讀取(qu)各(ge)管吸(xi)光度(du)值。